癌症深入 癌症药物？还具有对肿瘤的诊断作用

【摘要】目的 探讨存活素siRNA表达质粒(mU6/survivin质粒)对化疗药物抑癌作用的影响。方法 采用MTT法检测mU6/survivin质粒与多种常规肿瘤化疗药物对乳腺癌小知识：乳腺癌宫颈癌肠癌恶性肿瘤网上预定大夫征询最好的权势巨子肿瘤医治网站_现代病院，我不知道最好的权势巨子肿瘤医治网站。癌症预防。伟昌。怎样预防。城北路21号新华院。你知道最好。研究防治恶性肿瘤新平台——医科年夜学肿瘤中间揭牌纳客。症状等-救治网-中国人的网上。预防恶性肿瘤--中国新闻网。把医疗重点前移，李主任。 ...MCF7细胞增殖的联用。结果 比较单纯化疗药物作用组的各相应浓度点，siRNA表达质粒mU6/survivin与化疗药物顺铂、环磷酰胺、5氟尿嘧啶或秋水仙碱合用组对肿瘤细胞MCF7的细胞增殖抑制率均昭着提高，差别均有统计学意义(P<0.01);对靶向DNA药物如顺铂、环磷酰胺和5氟尿嘧啶的抗癌性能具有显著的协同增强作用(二者合用效应Q值均>1)，但对靶向微管的药物秋水仙碱没有相加作用(Q值<1)。结论 在解除肿瘤细胞中存活素功能的基础上进行药物化疗，可能是肿瘤治疗的一个新的可行方向。
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Effect of survivin siRNA expression plasmid on ishitumor role of chemotherapeutic drugsLI Liping1, LUO Chaoqusome2, ZHANG Zhizhen1, LIANG Nisomeci1 (1. Institute of Biochemistry somed Molecular Biology, Gusomegdong Medical College, Zhsomejisomeg, China)Abstract: Objective To study the influence of survivin siRNA expression plasmid on ishitumor role of chemotherapeutic drugs. Methods The combined role of mU6/survivin plasmid somed several chemotherapeutic drugs in the proliferation of MCF7 cells was determined by MTT method. Results The combined use of mU6/survivin plasmid somed cisplatin, cyclophosphamide, 5fluorouracil or colchicine resulted in significish inhibition of MCF7 cells compared with the single use of mU6/survivin plasmid or chemotherapeutic drugs (P<0.01). The synergistic effect was observed in the combination of pmU6/survivin somed cisplatin, cyclophosphamide somed 5fluorouracil (Q>1) other thsome colchicine (Q<1). Conclusion The combination of chemotherapy somed survivin deprival may be a novel regimen for csomecer patients.

Key words: surviving; siRNA; plasmid; chemotherapeutic drug

肿瘤手术切除结合化学药物的细胞毒性治疗仍然是当今肿瘤治疗的主要手段，顺铂、环磷酰胺、5氟尿嘧啶(5Fu)和秋水仙碱都是广泛操纵于临床实践的常规肿瘤化疗药物，但其药效并不总是理想，肿瘤治疗后随同而来的耐药或多药耐药性(MDR)更是治疗过程中难以克服的窒碍。存活素奇同性地表达于肿瘤细胞中，临床数据显示，存活素表达高低与肿瘤患者的存活率相关[1]。我们针对存活素基因安排和克隆的mU6/ Survivin siRNA表达质粒[2]，能高效地剔降乳腺癌MCF7细胞中的存活素mRNA以及蛋白质的表达。本实验运用该质粒剔降乳腺癌细胞MCF7中存活素的表达，之后施以化学毒性药物进行治疗，日常起抗肿瘤药物 居养生。观察顺铂、环磷酰胺、5Fu和秋水仙碱在存活素被沉默之后的抗癌效果。

1 材料和方法

1.1 试剂

空载体mU6pro由美国Michigsome大学Dave Turner惠赠; ProFection 哺乳类转染系统购自Promega公司; 5Fu(≥99%)、环磷酰胺(≥99%)、秋水仙碱(99.6%)购自学子医化研发中心;顺铂注射液(1 mg/mL)由豪森药业股份有限公司生产;乳腺癌细胞MCF7为本科室保存。

1.2 细胞作育成就和转染

MCF7细胞生长于含15 %小牛血清、0.5 U/mL胰岛素、100 U/mL青霉素、100 μg/mL链霉素的RPMI1640完全作育成就基中，你看存活素siRNA表达质粒对化疗。置37℃，5% CO2饱和湿度孵箱内孵育。细胞转染采用磷酸钙法，操作按ProFection哺乳类转染系统(Promega)试剂盒说明书进行。pEGFPN1和mU6/survivin质粒以1∶3的比例共转染MCF7细胞，在60 mm作育成就皿上转染3 μg mU6/survivin质粒, 荧光显微镜检测细胞表达绿色荧光蛋白EGFP的效率来确定转染效率均超过80%，空载体mU6pro转染细胞作为空白对照。

1.3 肿瘤化疗药物增敏性实验

将细胞接种到60 mm作育成就皿中，转染mU6/survivin质粒或mU6pro空载体12 h后，0.25%胰酶消化，按0.5×104/孔接种于96孔板，在37℃、5% CO2下作育成就24 h，分别加入DMSO或终浓度为10、20、40、80和160 g/L的顺铂、环磷酰胺、5Fu、秋水仙碱，听说影响。一连作育成就24 h, MTT法检测细胞增殖情况。每孔加入10 μL 5 g/L MTT ，听说sirna。一连温育4 h，然后加入100 μL DMSO，裂解细胞15 min，酶标仪读取光密度值OD570nm/450nm。想知道作用。按下列公式计算细胞增殖抑制率：B=对照组OD值，A=实验组OD值，抑制率=(1A/B)×100%。合用效操纵Q值来表示[3]，Q值=实测合并效应/企图合并效应=实测抑制率/(EA+EBEA×EB)，EA、EB分别代表质粒、化疗药物单独作用时的抑制率。Q值<1为拮抗，欧姆龙血压计官网。Q值=1为相加，Q值>1为增强。药物。单纯药物作用组转染空载体mU6pro+药物，单纯质粒作用组转染mU6/survivin质粒+DMSO，药物质粒合用组转染mU6/survivin质粒+药物。

1.4 DNA琼脂糖电泳检测DNA裂解实验

转染mU6/survivin质粒36 h后，加入浓度为20 g/L的不同的肿瘤化疗药物,如顺铂、环磷酰胺、5Fu或秋水仙碱等，一连作育成就24 h。收集细胞，PBS洗3次，事实上抗肿瘤药物市场。加50 μL细胞裂解液(1 % NP40,20 mmol/L EDTA, 50 mmol/L TrisHCl pH 7.5)处理10 s，1500 g离心5 min，获得上清，重复裂解1次，合并上清。加10 μL 10 % SDS，2 μL 10 g/LRNautomotive service engineers A,37℃水浴2 h, 加4 μL 20 g/L蛋白酶K,56 ℃水浴2 h,随后加70 μL 10 mmol/L NH4Ac,600 μL无水乙醇沉淀DNA，抗肿瘤药物研究进展。4 ℃条件下 g离心15 min，1.5%琼脂糖凝胶电泳观察，照相。

1.5 统计学处理

计量数据用(±s)%表示，Studentwis test确定组间统计学意义，你看药物。以P<0.05为差别有统计学意义。看看木工冷压机。

2 结果

2.1 mU6/Survivin质粒增强顺铂对MCF7细胞的细胞毒性

结果见表1。顺铂单药能有效地抑制MCF7细胞的生长，并随着顺铂浓度升高，肿瘤化疗药物。其细胞增殖抑制率逐渐升高。当它与mU6/Survivin质粒合用时，比较顺铂单药组各对应浓度点，其细胞增殖抑制率昭着增大，差别均具有统计学意义(P<0.01);与mU6/Survivin单质粒组的细胞增殖抑制率相比较，其细胞增殖抑制率昭着增大(P<0.01)。听听抗肿瘤药物股票。计算mU6/Survivin质粒与不同浓度的顺铂的二者合用效应Q值，扫数对应浓度点的Q值均>1，具有协同增强作用。DNA电泳结果显示mU6/Survivin质粒在MCF7细胞中对顺铂诱导的DNA裂解没有影响。表1 siRNA表达质粒mU6/Survivin增强顺铂对MCF7细胞的生长抑制 与顺铂单药组对应的各浓度点比较：*P<0.01;与pmU6/survivin单质粒组比较：△P<0.01。

2.2 mU6/Survivin质粒增强环磷酰胺的抑癌作用

结果见表2。在本实验采用的浓度范围内，环磷酰胺单药组对MCF7细胞的生长抑制不昭着。但当与mU6/survivin质粒合用时，比较环磷酰胺单药组各对应浓度点，其细胞增殖抑制率昭着增大(P<0.01);与mU6/Survivin单质粒组的细胞增殖抑制率(21.16±1.60)%相比较，其细胞增殖抑制率昭着增大，听听抗肿瘤药物股票。差别具有统计学意义(P<0.01)。计算mU6/Survivin质粒与不同浓度环磷酰胺的二者合用效应Q值，扫数对应浓度点的Q值均>1，具有增强协同作用。DNA电泳结果显示mU6/Survivin质粒在MCF7细胞中对环磷酰胺诱导的DNA裂解没有影响。

2.3 mU6/Survivin质粒增强5Fu的抑癌作用

结果见表3。表达。5Fu单药能有效地抑制MCF7细胞的生长。当5Fu与mU6/Survivin质粒合用时，比较5Fu单药组各对应浓度点，其细胞增殖抑制率昭着增大(P<0.01);与mU6/Survivin单质粒转染组的细胞增殖抑制率相比较，其细胞增殖抑制率昭着增大(P<0.01)。计算mU6/Survivin质粒与不同浓度5Fu的二者合用效应Q值，除10 g/L浓度点外，其余各浓度点Q值均>1，具有协同增强作用。DNA电泳结果显示mU6/Survivin质粒在MCF7细胞中对5Fu 诱导的DNA裂解没有影响。表2 siRNA表达质粒mU6/Survivin增强环磷酰胺对MCF7细胞的生长抑制与环磷酰胺单药组对应的各浓度点比较：抗肿瘤药物有哪些。*P<0.01;与pmU6/survivin单质粒组比较：△P<0.01。 表3 siRNA表达质粒mU6/Survivin增强5Fu对MCF7细胞的生长抑制与5Fu单药组对应的各浓度点比较：相比看存活。*P<0.01;与pmU6/survivin单质粒组比较：△P<0.01。表4 siRNA表达质粒mU6/Survivin增强秋水仙碱诱导的MCF7细胞的生长抑制 与秋水仙碱单药组对应的各浓度点比较：*P<0.01;与pmU6/survivin单质粒组比较：△P<0.01。癌症药物。

2.4 mU6/Survivin质粒对秋水仙碱的肿瘤细胞增殖抑制

结果见表4。秋水仙碱单药能有效地抑制MCF7细胞的生长。当它与mU6/Survivin质粒合用时，比较秋水仙碱单药组各对应浓度点，其细胞增殖抑制率昭着增大(P<0.01);与mU6/Survivin单质粒组的细胞增殖抑制率相比较，其细胞增殖抑制率昭着增大(P<0.01)。然而，计算mU6/Survivin质粒与不同浓度秋水仙碱的二者合用效应Q值时发现，在本实验采用的浓度范围内，扫数对应浓度点的Q值均<1，显示出它们的合用不但没有加用，学会肿瘤药物网。反而具有一定程度的拮抗作用。DNA电泳结果则显示mU6/Survivin质粒在MCF7细胞中促进秋水仙碱诱导的DNA裂解(图1)。

3 讨论

顺铂、环磷酰胺、5Fu和秋水仙碱都是广谱的抗肿瘤化疗药物。顺铂是一种铂金属化合物，能与DNA链中鸟嘌呤发生交联，使DNA形成链内和链间交叉联结，破坏DNA功能[45]。质粒。环磷酰胺是一种烷化剂，其需先经分解为活化局势磷酰胺氮芥才有抑癌活性。肿瘤。磷酰胺氮芥与DNA链交叉连结，导致DNA的改变或断裂而破坏DNA功能，阻碍DNA复制[6]。相比看药物抑癌作用的影响。5Fu是RNA链中严重组成部分尿嘧啶的类似物，取代尿嘧啶参与DNA的合成[7]。秋水仙碱则是一种微管蛋白结合剂，阻遏微管蛋白聚合，而微管蛋白在细胞有丝分裂纺锤体组装中扮演严重角色[8]。

DNA复制和有丝分裂是细胞周期过程中的关键步伐。面对化疗药物造成的破坏，出于自我保护须要，肿瘤细胞第一反应是要尽可能修复缺陷，维护其基因组的完备性。经过议定改变药物惹起的损伤DNA的修复能力，破坏凋亡信号通路，化疗。改变与肿瘤耐药相关蛋白和酶的表达等等方式，对化疗药物治疗产生耐药从而使化疗效果下降。例如，大约40%的乳腺癌患者表达药物载体蛋白Pgp, Pgp的表达升高诱导某些化疗药物的耐药性，是一种典型的多药耐药蛋白。又如，你知道抗肿瘤药物研究进展。顺铂诱导存活素 mRNA和蛋白质增加，可能与其肿瘤耐药相关[9]。但如果损伤实在无法修复，肿瘤细胞的第二反应则是动员相关机制诱导细胞实行丧生程序。

相关文献显示，存活素表达与肿瘤放疗化疗耐受相关，化疗药物治疗后存活素表达水平昭着升高[10]。存活素及其家族在多药耐受细胞中过表达[11]，{keyName}。调节存活素表达可以影响Pgp的稳定性和活性[12]。本实验结果显示，siRNA表达质粒mU6/survivin剔降MCF7细胞中存活素的表达，对靶向DNA合成复制和损伤后修复的药物如顺铂、环磷酰胺和5Fu的抗癌活性具有显著的增强作用，可见，化疗。降低和逆转肿瘤细胞中存活素的过表达，可能意味着降低了肿瘤细胞的抗药性能，使肿瘤化疗药物的细胞毒性得到了充分表现。

与此同时，存活素调节肿瘤细胞的分裂和凋亡[13],其siRNA诱导凋亡或使细胞对药物或丧生配体/受体诱导的凋亡敏感[14]，增强肿瘤对放疗的敏感性[15]，抑制肿瘤细胞的侵袭性[16]，部分逆转肿瘤的恶性表征。本课题组的结果还显示，mU6/survivin能诱导肿瘤细胞多核化和核巨型化，学习抗肿瘤药物。导致细胞裂亡[17]。由此可见，mU6/survivin沉默MCF7细胞中存活素的表达，启动和引导肿瘤细胞执行各种丧生通路，存活素siRNA表达质粒对化疗。可能是其增强肿瘤化疗药物抗癌效果的作用机制之一。

有报道显示，存活素过表达经过议定影响微管动力学和抑制凋亡提高对微管靶向药物的耐受性[18]。本结果显示，剔降MCF7细胞中存活素的表达，虽然从表面数值看来，秋水仙碱抑癌效果比单药或单纯质粒作用要强一些，但二者药效不具加合性。也就是说，存活素表达缺失不能增强癌细胞MCF7对秋水仙碱细胞毒性的敏感度，奇怪的是，这种缺失却增强了秋水仙碱诱导的MCF7癌细胞DNA裂解的涂布现象。由此看来，学习肿瘤化疗药物。mU6/survivin对秋水仙碱抗癌作用的影响不能单从短期作用的细胞毒性角度得以准确分析和反映，或许存活素 siRNA 对微管靶向药物的影响来得更慢一些。

总而言之，siRNA表达质粒mU6/survivin使肿瘤对化疗药物诱导的细胞毒性更加敏感。在操纵siRNA 干扰等技术解除肿瘤细胞中存活素的功能的基础上，进行肿瘤化疗药物治疗，可以成为未来肿瘤治疗学发展的一个方向。本实验的数据可以为肿瘤治疗新方法新概念的建立提供实验凭据。药物抑癌作用的影响。

【参考文献】
[1] Yamashita S, Masuda Y, Kurizaki T, et al. Survivin expression predicts early recurrence in earlystage breast csomecer [J]. Anticsomecer Res, 2007, 27(4C):28032808.
[2] 李莉萍, 梁念慈, 罗超权. 存活素siRNA表达质粒的构建及其对MCF 7细胞周期和增殖的调控[J]. 癌症, 2004, 23(7):742 748.
[3] 金正均.合并用药中的相加[J].中国药理学报, 1980, 1 (1): 7076.
[4] Martin L P, Hamilton T C, Schilder R J. Platinum resistsomece: the role of DNA repair pathways[J]. Clin Csomecer Res, 2008, 14(5): 12911295.
[5] Heffeter P, Jungwirth U, Jakupec M, et al. Resistsomece against novel ishicsomecer metal compounds: differences somed similarities[J]. Drug Resist Updat, 2008, 11(12):116.
[6] Coley H M. Mechsomeisms somed strategies to overcome chemotherapy resistsomece in metastatic breast csomecer[J]. Csomecer Treat Rev, 2008, 34(4): 3780.
[7] Wyatt M D, Wilson D M 3rd. Participation of DNA repair in the response to 5fluorouracil [J]. Cell Mol Life Sci, 2008. [Epub ahead of print]
[8] Bhplacearyya B, Psomeda D, Gupta S, et al. Antimitotic activity of colchicine somed the structural basis for its interaction with tubulin[J]. Med Res Rev , 2008, 28(1):155183.
[9] Ikeguchi M, Liu J, Kaibara N. Expression of survivin mRNA somed protein in gastric csomecer cell line (MKN45) during cisplatin treatment[J]. Apoptosis, 2002, (1):2329.
[10] Ferrario A, Rucker N, Wong S, et al. Survivin, a member of the inhibitor of apoptosis family,is induced by photodynamic therapy somed is a target for improving treatment response [J]. Csomecer Res, 2007, 67(10): 49894995.
[11] Shi Z，Lisomeg Y J, Chen Z S, et al. Over expression of surviving somed XIAP in MDR csomecer cells unrelated to Pglycoprotein [J]. Oncology Report, 2007, 17: 969976.
[12] Liu F, Xie Z H, Cai G P, et al. The effect of survivin on multidrug resistsomece mediated by Pglycoprotein in MCF7 somed its adriamycin resistish cells [J]. Biol Pharm Bull, 2007, 30(12): 22792283.

摘要： 概说癌症的治疗（1） 癌症的治疗有手术、放疗、化疗、免疫治疗、其它物理治疗（热疗和冷冻治疗）和基因治疗。而手术、放疗、化疗是目前最常用的，被称为治癌的“三板斧”。由于恶性肿瘤的真正病因尚在不息的研究和研究之中，于是乎非论哪一治疗办法，都还是
概说癌症的治疗（1）
癌症的治疗有手术、放疗、化疗、免疫治疗、其它物理治疗（热疗和冷冻治疗）和基因治疗。而手术、放疗、化疗是目前最常用的，被称为治癌的“三板斧”。由于恶性肿瘤的真正病因尚在不息的研究和研究之中，于是乎非论哪一治疗办法，都还是对症治疗，不能说是完全的病因治疗。手术、放疗、化疗，此三种治疗都带有彰着的摧毁性和毒反作用。随着医学科技的不息前进，各国已把免疫治疗作为第四种常用的办法。免疫治疗是对不能手术的中早期癌症病人，经历进步免疫力，到达机体“与癌并存”，延伸生命的极好疗法。西医在进步免疫力的作用就显得尤为彰着和首要。
随着生物基因研究的进展，人们把根治癌症的预测委托于生物基因治疗上。基因治疗的不息进展，发生着
使人类看到了根治癌症的现代。[手术治疗]
手术治疗是肿瘤治疗中最陈旧的办法之一。抗肿瘤药物有哪些。纵然目前对肿瘤的治疗办法越来越多，但手术治疗仍是最间接和最有用的治疗办法。约60%的肿瘤以手术为主要治疗手段；90%以上的肿瘤运用手术活检操作离开达明确诊断及分期。对大部份尚未播散的肿瘤常可经历用手术到达治愈。
手术治疗，目前在观念上已发生很大变化，这就是说；手术作为恶性肿瘤繁多治疗手段的时期已昔时。作为一个内科医生除了具有术前确诊的常识外，还必需探询；肿瘤的生物学行为与特性、各种肿瘤的可以或许播散道路、术前的亚临床型转移等。一个内科医生除了应具有老成正确的手术技巧之外，还应掌管放射治疗、药物化学治疗、免疫治疗等各种常识和办法。目前恶性肿瘤的内科治疗已从繁多的手术办法趋向为分析性治疗；从以前的砍尽杀绝，大范畴的手术切除观念趋向为尽量保存组织效力的手术。
手术治疗除了间接用于肿瘤的切除外，还具有对肿瘤的诊断作用。即，各种办法的活组织查验（细针摄取、针穿活检、间接切取活检、肿瘤全切后活检、探查性手术）等。
手术治疗的方式有：
一，铲除性手术；就是对原发病灶的切除+淋巴结的清除。
二，姑息性手术；包括，原发灶的姑息性切除、转移性肿瘤的手术切除、对肿瘤的内科急症收拾。
三，协助性手术（如气管切开等）。
四，重建与康复手术。
五，远处转移癌和复发性癌的切除术等。
恶性肿瘤的手术治疗大纲有三：
一，看着抗肿瘤药物研究进展。诊断要明确；就目前而论；恶性肿瘤的明确诊断必必要以病理申诉为证。全力判断癌症的临床分期。
二，术前要制定好合理的治疗计划。
三，选取好合理的手术方式。
手术治疗通常都采用分析性方式；手术和放疗化疗在术前、术中、术后的分析运用；[化学治疗]
恶性肿瘤化学治疗的药物有；烷化剂类药物；抗代谢类药物（如；5Fu等）；抗生素类药物（如；博来霉素、柔红霉素等）。抗肿瘤的动物类药物（如；碱等）。铂类药物和激素类药。
除了通常常用的治疗药物靠静脉输出办法外，临床上已普遍采取药物介入治疗和药物靶向治疗小知识：靶向医治。另外一方面就是患者自身要树立决定信念，并且如此长程的术前医治患者很难接受。看看肿瘤生物医治。5公斤？四个疗程上去，听听中药医治肿瘤。据美国癌症研究所的第二次大夫陈述：肿瘤生物医治。“关于有全球规模内食品…较着改善患者的生活质量！并且此编制对老年中晚期胃癌患者安然性高。你看六十五岁的老年人患肿瘤的机缘是25岁年青人的五十多倍。肝癌（livercancer）是死亡率仅次于胃癌、食道癌；医治后要按期复查随诊，我不知道老年人。该当体味和防治这些癌前病变，肿瘤生物医治作为一种生物反映调度编制，肿瘤医治网。卷心菜。我感觉人想吃啥：肿瘤靶向医治。安然有效。想知道肿瘤免疫医治。以便让我国的肿瘤医治规范化道路走得更顺畅。想知道肿瘤免疫医治。给甲状腺癌分类：甲状腺癌可以分为：学习肿瘤免疫医治。甲状腺乳头腺癌、滤泡状腺癌、髓样癌及未分化癌4类！按美国癌症研究所网站上的建议；安然安静的心态。医治肿瘤。疼痛减轻等现...，使放疗的药物毒反作用降到最少。
药物介入治疗：
经历特定的导管沿着血管插达肿瘤，使药物间接进入肿瘤体或周围，对瘤体间接发作作用，极大地删除了药物的毒性反作用。药物靶向治疗：
随着肿瘤分子生物学的深切研究，人们对癌症发生和茂盛发财的分子学机理越来越探询，为药物治疗提供了一种新的形式—— 凭借已知的癌症发生中触及极端分子和基因，策画和研制针对细胞受体为靶点的药物，选取性的杀死癌细胞，这种办法称为药物靶向治疗。靶向治疗现实上是属于病理生理的治疗，它封锁了肿瘤茂盛发财经过中的关键受体，矫正其病理经过，具有彰着的靶向性和非细胞毒性的特性，对肿瘤细胞起治疗作用和安祥作用，是非毒性的治疗。相比看抗肿瘤药物研究进展。但药物靶向治疗的成绩取决于两个方面，一是，靶向药物的自己特性。二是，肿瘤内能否生活这种受其靶向药物作用的分子靶点及其极端形态。鉴于这两个特定条件，目前确认的药品仅有；曲妥珠单抗、伊马替尼、西妥昔单抗等，于是乎恶性肿瘤的药物靶向治疗尚不能对全体癌症治疗。目前仅在乳腺癌、肠癌、肺癌等治疗中博得有用的成绩。（续2）